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冷冻保存同种异体血管研究进展 |
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作者：admin 2006-11-26 22:12:20 |
冷冻保存同种异体血管研究进展
发布时间： 2003-3-2 作者：孙炜 周建生 胡汝麒 许忠风
随着现代免疫学、冷冻生物学、分子生物学的发展， 冷冻保护剂、 免疫抑制
剂的应用以及注重移植结构及功能的完整。冷冻保存同种异体静脉无论是基础研究
还是临床实践都获得相当经验，但存在移植物再狭窄及替代小口径动脉(＜2 mm)
失败率高的 缺点。近年来，有关动脉作为血管替代物逐渐被重视，取得一些进展
，但尚需继续长期地探 索和实践。
1 血管移植免疫进展
大量的实验和临床结果不但证实血管内皮细胞(EC)是移植排斥重要的靶器官，
而且通过其抗 原递呈作用、表型变化和细胞因子合成等，主动参与移植排斥过程
。EC表达多种抗原，如： ABO血型抗原，MHC抗原和血管内皮细胞抗原系统。在排
斥过程中，EC上的抗原与其相应的抗 体结合形成抗原抗体复合物，激活补体释放
趋化因子，白细胞在补体参与下溶解EC，使基底 膜暴露，激活凝血系统，形成血
栓，激活的巨噬细胞释放白介素-1、肿瘤坏死因子等可提 高EC表面组织因子活性
，增加纤溶酶激活物抑制因子和减少血栓调理蛋白，EC在细胞因子刺 激下可合成
和分泌单核细胞趋化因子MCP-1/JE，吸引单核巨噬细胞迁移至移植物局部。同 时
表达Class Ⅱ抗原，提供所有激活CD4+ T细胞所必需的信号，并可产生各种细胞因
子， 引 起表型的变化。另外内皮细胞膜还可作为血管紧张素转化酶场所，以使血
管紧张素Ⅰ转化成 血管紧张素Ⅱ，使血管收缩。近来，一些学者发现血管平滑肌
细胞也表达Class Ⅰ和Class Ⅱ抗原系统，参与排斥反应全过程〔1〕。
2 同种异体血管移植的基础研究进展
2.1 移植前血管处理及冷冻复温技术
2.1.1 制备 (1)供体选择来源于新鲜尸体及创伤性截肢患者，采用美国组织
库协会(AATB) 制 定的标准〔2〕。取血管应在死后4 h完成，所有操作均在无菌条
件下进行。(2)制备 技术的基本原则：从供体获取血管应严格遵循无创伤技术；获
取血管前15～30 min，供体给 予平滑肌松弛剂(罂粟碱)及抗凝药物(肝素)，以防
止血管痉挛和血栓形成；保持制备液和室 温37℃；灌注压＜100 mg。(3)理论上以
37℃自身含罂粟碱肝素化血液低压灌注可最好保持 血管的生物活性，但通常从供
体获取血液是困难的。目前常采用37℃的生物培养液(如DMEM ，1640)，Brocdban
k等获得保存24 h后80%内皮细胞存活率和平滑肌收缩度最大限度的保持 〔3〕。
2.1.2 冷冻复温 随着冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)和甘油的应用及控温冷
冻技术的成熟 ，血管活性得以很好的保持。DMSO因穿透力强，研究较多，其浓度
以15%为最佳。控温冷冻 第二步温值在-60～-80℃之间，冷冻速率为0.5～1℃/mi
n，复温采用37℃水浴快速复温。经 过这样处理的静脉获得80%的内皮细胞存活率
。Banbang等证实这些内皮细胞具有与正常内皮 细胞相似的增值和抗凝血功能〔4
〕。Salomon等也从冷冻保存静脉上获得表达HLA抗 原的平滑肌细胞〔1〕。
2.2 实验性同种异体移植与自体移植的比较性研究 同种异体血管移植的 主
要障碍是受体 的免疫排斥反应。因此，研究在免疫缺陷的情况下在体冷冻保存血
管移植的变化是必需的。 这样自体冷冻血管不仅检验血管制备及宿主对移植物产
生排斥反应的冷冻保存技术的效果， 而且通过与同种异体移植物移植后组织结构
与功能的对比，了解同种异体移植物在整个过程 中的变化。
自体移植物在移植过程中，可因离体缺血、牵拉、切割、吻合及在受体动脉高
压冲 击下，内皮细胞可有不同程度的坏死，从而使位于内皮细胞下的结缔组织裸
露于血流，使附 壁血栓形成。1周后残留的附壁血栓向致密而平滑的纤维被膜演变
，同时内皮细胞再生开始 。内膜增生和动脉粥样硬化是发生在内皮下层两个相关
联的病理现象，或许是不可避免的创 伤适应性改变。移植血管中膜可见平滑肌细
胞坏死和纤维替代，外膜因部分胶原纤维束断裂 和血管滋养管栓塞，形成纤维瘢
痕，移植后72 h，新的滋养血管出现，2个月后基本恢复正 常，神经再生于2～4周
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