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羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值论文

  资料与方法

  一般资料 选择2017年4月~2017年4月在本院产科就诊的具有产前诊断指征的178例孕妇, 年龄20~47岁, 孕周16~25周, 有70例孕妇唐氏综合征筛查为阳性, 23例孕妇有异常生育史, 60例孕妇年龄≥35岁, 14例妇女于早孕服药, 6例孕妇神经管急性筛查为阳性, 5例孕妇丈夫染色体异常。

  方法

  羊膜穿刺 经b超定位后, 在无菌条件下, 用一次性羊水穿刺针行羊膜穿刺术。舍弃最开始的2 ml羊水, 再抽取20~30 ml的羊水放入2支无菌离心试管中。

  羊水细胞培养 以1000 r/min的离心速度将2支无菌试管中的羊水进行离心处理达10 min, 舍弃上层清液, 保留管内沉淀细胞和0.5 ml羊水, 加入20%胎牛血清及含张氏成分的5 ml f10培养基, 用细管使之混匀, 将其接种于t-25的无菌试管中, 在37℃有5%二氧化碳培养环境中进行培育, 5 d后观察细胞生长情况, 若发现纤维状或者梭状细胞生长是, 则可更换5 ml新鲜培养液进行传代培养[2]。

  收获细胞并进行制片 在对羊水细胞进行培养6~7 d后, 在倒置的显微镜下对正在培养的羊水细胞进行观察, 观察其生长情况, 发现有不同大小的梭长形细胞正在进行克隆并生长, 每个克隆过的细胞其生长状态良好并且已经形成细胞岛。对培养皿中的培养液进行定时的更换, 每天对细胞进行观察, 在观察2~3 d后, 发现每个形成的细胞岛已经逐渐长成为透亮细胞, 这些细胞较大, 细胞融合度达到70%~80%, 并且数目不等, 形状多呈圆形或类圆形, 这时即可对细胞进行连连棋牌收获。在对细胞进行收获的前1 d, 更换新鲜培养液, 在培养液中加入秋水仙素, 使其浓度达到0.1 mg/ml, 在4~5 h后, 使用显微镜观察, 发现培养液中出现大量的呈鱼眼状的细胞时, 即可对细胞终止培养并进行收获。加入0.25%的2 ml胰酶消化液, 在37℃的环境下放置5 min, 使得瓶壁上细胞脱落, 再以1500r的转速离心处理8 min, 弃上清液。加入1.5 ml的0.4%枸缘酸钠和0.4%的氯化钾混合液低渗7 min, 滴片, 常规g显带。每张玻片有20~30个细胞分裂相, 进行染色体核型分析, 每例分析核型5个。

  核型统计分析 使用显微镜对细胞核型进行观察, 常规技术分散良好的细胞核型有30个中期分裂相, 细胞核型计数发生异常的则有50个分裂相, 如出现≥2个细胞核型计数异常, 则对所有分裂相进行计数, 使用染色体核型分析软件对核型图像进行采集, 对3~5个核型进行分析, 并完成报告, 为遗传咨询提供意见。

 

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